Superfect高效介导PDX-1基因在骨髓间质干细胞表达

• 作者: 孙吉平 杨于嘉 王晓莉 贾延劼
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间质干细胞 基因,胰腺十二指肠同源框1 糖尿病
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4642字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.01.003

摘要

目的:构建含有胰腺十二指肠同源框1(PDX-1)基因的真核表达载体,并提高重组载体在骨髓间质干细胞(MSCs)的表达效率,为骨髓MSCs作为糖尿病基因治疗的靶细胞奠定基础.方法:RT-PCR体外扩增PDX-1基因,双酶切后整合入相同双酶切的真核表达载体构建重组载体,对重组载体进行酶切分析和序列测定进行鉴定;利用Percoll细胞分离液体外培养大鼠骨髓MSCs,流式细胞仪检测细胞周期后,Superfect介导正确重组的载体转染骨髓MSCs,检测转染效率和细胞存活率从而对转染条件进行优化;G418筛选阳性细胞后,RT-PCR和Western blotting检测PDX-1基因在骨髓MSCs中的表达.结果:重组载体双酶切分析和序列测定证实重组载体构建成功.流式细胞仪显示85.9%的MSCs处于G0/G1期,提示骨髓MSCs具有强大的分化潜能;荧光显微镜下成功转染的细胞呈现全细胞绿色荧光,Superfect介导的转染效率和细胞存活率与其绝对用量和孵育细胞的时间有关;RT-PCR显示转染后PDX-1基因在骨髓MSCs表达,随转染时间延长,表达逐渐增强,与Western blotting结果一致.结论:成功构建了含有PDX-1基因的真核表达载体;Superfect能高效介导外源性基因在骨髓MSCs中表达;转染外源性基因的MSCs可望成为一种理想的基因治疗的载体细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾延劼	郑州大学第一附属医院神经内科	115	486	11.0	15.0
2	杨于嘉	中南大学湘雅医院儿科	143	2010	22.0	39.0
3	王晓莉	中南大学湘雅医院儿科	10	109	6.0	10.0
4	孙吉平	中南大学湘雅医院儿科	8	480	5.0	8.0