小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达

• 作者: 周光纪 唐军 屈纪富 徐海伟 李达兵 杨丽
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,pdx-1 胚胎干细胞 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1204-1207
• 页数: 4页
• 分类号: R318.15
• 字数: 3714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.06.038

摘要

目的:克隆小鼠pdx-1基因,构建其真核表达载体,并在小鼠胚胎干细胞中表达,为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础.方法:PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA,酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组,将pdx-1基因 cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点,形成重组载体pEGFP/pdx-1,转化大肠杆菌DH5α菌株,构建成pdx-1基因真核表达载体质粒.扩增DH5α后抽提质粒DNA,Hind Ⅲ和BamHⅠ酶切,电泳,DNA测序鉴定.鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13.结果:从小鼠胰腺cDNA扩增出876 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中.经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为pdx-1基因,插入方向正确.重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13,24 h后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达.结论:小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐海伟	第三军医大学生理学教研室	76	338	11.0	13.0
2	杨丽	第三军医大学生理学教研室	48	244	9.0	12.0
3	唐军	第三军医大学生理学教研室	14	126	6.0	11.0
4	李达兵	第三军医大学生理学教研室	6	30	3.0	5.0
5	周光纪	广东医学院基础部生理学教研室	26	168	8.0	12.0
6	屈纪富	第三军医大学附属西南医院急诊科	54	425	11.0	19.0