斑马鱼VEGF基因的siRNA表达载体构建、有效序列筛选及其对基因表达的干预性研究

• 作者: 杨少丽 林秀坤 王征 郑兰红 阎松
• 来源期刊: 生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 斑马鱼 血管生成 血管内皮生长因子
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 分子生物物理
• 页码范围: 364-370
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-6737.2007.05.007

摘要

为探索小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)表达质粒在研究斑马鱼血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因调控网络中的应用,构建了4个以斑马鱼VEGF基因为靶点的siRNA表达载体pS1-VEGF、pS2-VEGF、pS3-VEGF及pS4-VEGF.通过显微注射的方法将载体导入1-2细胞期斑马鱼体内,于胚胎发育的48 h采用RT-PCR的方法检测VEGF基因的表达量,研究不同干扰序列对VEGF基因表达的干涉作用.结果显示,成功地构建了siRNA表达载体.针对不同位点的寡核苷酸序列抑制VEGF基因表达的效率有显著差异,其中注射了pS1-VEGF的胚胎出现了心包膜水肿、血流速度减慢、循环红细胞堆积等症状,同时肠下静脉、节间血管以及其它血管出现不同程度的发育缺陷.实验结果说明,pS1-VEGF可引起斑马鱼胚胎血管发育缺陷.