黑斑蛙精巢组织cDNA文库的构建及泛素基因序列的分析

• 作者: 李洁 聂刘旺 芮金龙 郑萍萍 陈文
• 来源期刊: 动物学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑斑蛙 总RNA SMART技术 cDNA文库 泛素
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物学与进化
• 页码范围: 9-16
• 页数: 8页
• 分类号: Q959.5
• 字数: 673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5853.2007.01.002

摘要

采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)技术构建了黑斑蛙(Rana nigromaculata)精巢组织全长cDNA文库. 一步法提取成体蛙精巢组织总RNA, 用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA; 再用LD-PCR合成双链cDNA; 经过Sfi Ⅰ酶切和Chroma spin-400柱分离后, 500 bp以上的片段与λTriplEx2载体连接, 再用Gigapack(R) Ⅲ Gold Packaging Extract包装蛋白包装, 即获得原始文库. 原始文库进行扩增后得到扩增文库. 经检测原始文库的滴度分别为2.0×106 pfu/mL和2.4×106 pfu/mL, 扩增后的文库滴度分别为0.48×109 pfu/mL和3.0×109 pfu/mL, 重组率均在90%以上. 通过E. coliBM25.8菌株将文库转化为pTriplEx2质粒, 挑选一阳性克隆进行PCR检测, 其插入片段平均长度约为1.0 kb. 挑取一阳性克隆分别从5'端和3'端进行测序, 得到一长约1 171 bp的序列. 经序列分析知, 该序列含有完整的编码框, 可编码305个氨基酸, 是一全长cDNA序列. 提示所建文库是可以用于全长cDNA的筛选. 结果表明, 所构建的黑斑蛙精巢组织cDNA文库的各项指标均满足建库的基本要求. 该文库将为蛙类及两栖类的已知或未知的功能基因及新基因的获得及其研究提供可靠资源; 另外, 该文库还将为研究蛙类动物的性别决定和分化相关基因及其表达提供直接的分子资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂刘旺	安徽师范大学生命科学学院	117	1504	19.0	34.0
2	芮金龙	安徽师范大学生命科学学院	3	10	2.0	3.0
3	李洁	安徽师范大学生命科学学院	11	36	4.0	5.0
4	郑萍萍	安徽师范大学生命科学学院	2	19	2.0	2.0
5	陈文	安徽师范大学生命科学学院	4	39	4.0	4.0