H5N1亚型禽流感病毒NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中的表达

• 作者: 刘波 曹广力 薛仁宇 贡成良
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 禽流感病毒 H5N1 NS1基因 表达
• 年，卷（期）: 2007,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1067-1070
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.11.001

摘要

目的 构建大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,将H5N1亚型禽流感病毒NS1基因分别在大肠杆菌和昆虫细胞中进行表达,表达产物用Western blot进行检测分析.方法 酶切含有NS1基因的质粒pUC-NS1,分别克隆进大肠杆菌表达载体pET-28a(+)和杆状病毒转移载体pFastBacHT A中,分别获得表达载体pET-NS1和pFast-NS1.将pET-NS1转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达;将pFast-NS1转化DH10Bac感受态细胞,提取重组Bac-NS1 DNA,以M13为通用引物作PCR鉴定,阳性Bac-NS1用脂质体转染sf9细胞,72 h后收集感染细胞.大肠杆菌表达产物和细胞表达产物分别裂解后作SDS-PAGE和Western blot分析.结果 成功构建了大肠杆菌表达载体pET-NS1和昆虫杆状病毒转移载体pFast-NS1,大肠杆菌和昆虫细胞中表达的融合蛋白Western blot都能检测到特异性条带.结论 NS1基因在大肠杆菌和昆虫细胞中得到成功表达,为获得大量NS1蛋白进行功能研究及抗体制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	薛仁宇	苏州大学生命科学学院	110	944	17.0	24.0
2	贡成良	苏州大学生命科学学院	136	1227	19.0	27.0
3	曹广力	苏州大学生命科学学院	136	1198	19.0	28.0
4	刘波	苏州大学生命科学学院	20	108	6.0	10.0