限制性内切酶结合半巢式PCR法检测人肝癌P16抑癌基因启动子区甲基化研究

• 作者: 孙泽芳 孙芝琳 杨鲁川 王锦红 蒋磊 覃扬
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 半巢式PCR 甲基化敏感性内切酶 人原发性肝癌 P16基因 启动子甲基化
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 53-56
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3275字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.01.013

摘要

目的 建立甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法,研究原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态.方法 针对P16基因启动子区富含CpG的序列,设计3条引物,进行半巢式降落PCR扩增,检测原发性肝癌P16基因启动子区甲基化状态;并将P16基因启动子区340 bp片段克隆到pMD18-T载体,E.coli JM109扩增此质粒后经CpG甲基化酶M.Sss Ⅰ处理,再用Hpa Ⅱ酶切验证获得P16基因启动子区甲基化阳性的质粒P16Pm+并进行特异性和灵敏度实验.以此甲基化敏感的限制性内切酶结合半巢式降落PCR方法检测40例人原发性肝癌和3例正常人肝组织DNA样品的P16基因启动子区甲基化状态.结果 所采用的Hpa Ⅱ酶切后半巢式PCR方法的特异性强,灵敏度达100 fg;对40例人原发性肝癌组织DNA样品P16基因的启动子区甲基化状态检测显示甲基化阳性率为30%(12/40),3例正常人肝组织均为阴性(0/3).结论 P16抑癌基因启动子区甲基化可能与肝癌发生发展有关.本实验方法简便、成本低廉,并有高度的特异性与灵敏度,在大规模检查中有实际应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	覃扬	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	27	139	7.0	10.0
2	杨鲁川	四川大学华西基础医学与法医学院	26	153	8.0	11.0
3	孙芝琳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	14	101	6.0	9.0
4	孙泽芳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	11	84	6.0	8.0
5	王锦红	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	4	18	3.0	4.0
6	蒋磊	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室	8	18	2.0	4.0