白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

• 作者: 井申荣 毛旭虎 洪愉 邹全明 郭刚
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-10 毕赤酵母 多拷贝表达盒
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 81-86
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 4491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.02.003

摘要

目的 构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平.方法 体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切获得目的 基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到Bgl Ⅱ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815.从质粒pPIC9K上用Nde Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上.重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达.ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性.结果 所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105 U/mg.结论 已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹全明	第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室	258	1589	19.0	26.0
2	郭刚	第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室	62	417	13.0	16.0
3	毛旭虎	第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室	87	417	12.0	16.0
4	井申荣	第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室	7	67	3.0	7.0
8	洪愉	第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室	8	55	4.0	7.0