Pin1基因真核表达载体的构建及在宫颈癌HeLa细胞中的表达

• 作者: 卢运萍 周金华 徐茜 朱涛 李红雨 王世宣 胡春霞 邓东锐 马丁
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1 质粒构建 基因转染
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 633-636
• 页数: 4页
• 分类号: R737.33
• 字数: 3645字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2007.05.020

摘要

目的 构建一种含人肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1的质粒,以绿色荧光蛋白作为报告基因,观察其在宫颈癌HeLa细胞中的表达.方法 从人宫颈癌HeLa细胞中,以RT-PCR方法扩增出人Pin1基因全长cDNA序列(CDS),插入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1,脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测GFP-Pin1蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增出人Pin1基因;构建pEGFP-C1-Pin1重组质粒,体外成功转染入宫颈癌HeLa细胞,在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白的表达,免疫印迹法证实存在GFP-Pin1蛋白高表达;经G418筛选获得单细胞克隆.结论 重组质粒pEGFP-Pin1体外转染HeLa细胞后,目的基因能够在细胞内有效表达,检测方法简便可靠,为利用转染该目的基因的细胞进行下一步研究提供了实验基础.