HPV18 E6E7反义荧光真核表达载体的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的表达

• 作者: 卢运萍 司马妮 李春晓 王世宣 王娟 王薇 田训 罗爱月 马丁
• 来源期刊: 肿瘤防治研究
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒18型 E6/E7 反义 EGFP 宫颈癌
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 402-404
• 页数: 3页
• 分类号: R737.33
• 字数: 3081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3971/j.issn.1000-8578.2007.06.003

摘要

目的 构建HPV18型E6E7反义荧光真核表达载体,并观察其对宫颈癌HeLa细胞中HPV18 E6和E7基因表达的影响,探索反义技术用于治疗临床HPV感染及宫颈癌的可能性.方法 以HPV18型全基因质粒为模板,PCR法扩增HPV18型E6E7区716bp片段,利用基因重组技术将目的片段反向插入荧光真核表达载体pEGFP-C1,EcoR I酶切并测序鉴定;采用脂转法将重组质粒pEGFP-HPV18E6E7as(EGFP-18AS)转染宫颈癌HeLa细胞株,通过RT-PCR及western blot检测细胞中E6、E7 mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建HPV18 E6E7反义荧光真核表达载体EGFP-18AS,经脂质体转染HeLa细胞,48h后在荧光倒置显微镜下可见明显的绿色荧光,且细胞中E6、E7 mRNA及蛋白表达水平均明显下调.结论 反义荧光真核表达载体可以有效的抑制HPV18 E6、E7癌基因的表达,为治疗HPV感染和宫颈癌提供了一种新的方法.