广西沼泽型水牛γ-干扰素基因的克隆与原核表达

• 作者: 张为宇 石云良 郑小龙 阳玉梅 黄维义
• 来源期刊: 广西农业生物科学
• 学科: 农学
• 关键词: 沼泽型水牛 γ-干扰素 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术专栏
• 页码范围: 210-214
• 页数: 5页
• 分类号: S823.83
• 字数: 3813字
• 语种: 中文

摘要

本研究克隆了广西沼泽型水牛γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因,并构建了水牛IFN-γ原核表达质粒.从健康沼泽型水牛静脉无菌采血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用刀豆素A(Concanavalin A,ConA)诱导培养13 h后,提取细胞总RNA,用水牛IFN-γ基因特异性引物通过RT-PCR扩增水牛IFN-γ成熟肽编码区cDNA序列,将其克隆到pMD18-T载体中.RT-PCR产物电泳可见约457 bp大小目的片段.经过限制性酶切分析,测序证实克隆得到的基因序列正确.将IFN-γ成熟肽编码区基因片段切下亚克隆到表达载体pET-32a+中,构建成重组表达质粒pET-mIFN-γ.PCR、双酶切电泳和序列测定结果均证实已插入约457 bp的IFN-γ基因片段.经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,水牛IFN-γ基因在大肠杆菌中获得了高效的表达,融合蛋白的分子量为35 ku,表达量占菌体总蛋白的43.6%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄维义	广西大学动物科学技术学院	117	736	14.0	20.0
2	张为宇	广西大学动物科学技术学院	50	250	9.0	12.0
3	石云良	广西大学动物科学技术学院	20	55	5.0	6.0
4	郑小龙	广西大学动物科学技术学院	45	148	8.0	9.0
6	阳玉梅	广西大学动物科学技术学院	6	44	3.0	6.0