肝特异性假病毒转运系统的构建

• 作者: 周育森 安小平 张昕 朱晓峰 童贻刚 陈士华 陈锦辉
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 医学
• 关键词: 肝特异性 病毒载体 乙型肝炎病毒 基因转运
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 338-342
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R373.21
• 字数: 4816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2007.04.010

摘要

目的:探索一种针对慢性乙型肝炎的特异性长效基因治疗手段.方法:改造乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)为基因治疗载体,敲除其所有的开放阅读框(open reading frames,ORFs),同时保留包装信号序列,并且插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因.同时构建辅助细胞系,为上述病毒载体(假病毒)提供包装所需要的病毒蛋白.以该假病毒载体转染辅助细胞系,以酶联免疫方法检测细胞培养上清中乙型肝炎病毒抗原,并在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用透射电镜观察培养上清中的病毒颗粒,同时用实时定量PCR的方法对分泌到细胞培养上清中的假病毒进行了定量检测.结果与结论:以假病毒载体转染辅助细胞后,电镜观察到培养上清中乙肝病毒的丹氏粒(Dane particle).实时定量PCR分析结果显示,细胞分泌到培养上清的假病毒含量达103拷贝/μl.ELISA结果显示该上清中同时表达了HBV表面抗原和e抗原,通过荧光显微镜观察发现外源基因绿色荧光蛋白获得有效表达.