家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达

• 作者: 刘雷山 徐建华 朱家勇 王艳 许琴英 金小宝 马艳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 家蝇 天蚕素 抗菌肽 基因克隆 融合表达
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 311-318
• 页数: 8页
• 分类号: R384.2
• 字数: 531字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.04.001

摘要

目的 从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列.然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin.mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中.酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达.经SDS-PAGE分析,选用E. Coli BL21(DE3)作为表达宿主菌.表达的融合蛋白GSTmCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱家勇	广东药学院基础医学院	121	797	13.0	22.0
2	金小宝	广东药学院基础医学院	100	490	12.0	15.0
3	王艳	广东药学院基础医学院	21	146	8.0	11.0
4	马艳	广东药学院基础医学院	20	105	6.0	9.0
5	刘雷山	广东药学院基础医学院	9	82	6.0	9.0
6	许琴英	广东医学院病原生物学教研室	18	107	8.0	9.0