单细胞RT-PCR实验方法研究

• 作者: 夏照帆 熊杰
• 来源期刊: 国际遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 单细胞 RT-PCR mRNA
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 404-408
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5271字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4386.2007.06.002

摘要

目的 探索建立稳定可靠的单细胞RT-PCR实验体系.方法 以人β-actin和DPH2L基因为靶基因,通过各实验条件的比较优化,对单细胞RT-PCR扩增单个细胞中特异性目的基因和全细胞mRNA两种方法的扩增效果进行深入研究,并结合琼脂糖凝胶电泳和DNA测序技术,分析该方法的灵敏性、特异性、重复性和可靠性.结果 单个细胞中的全部mRNA均得到了扩增,扩增成功率为75%,产物经核酸定量均可达到μg水平,足够常规分子生物学实验之用.β-actin和DPH2L基因均得到特异性扩增产物,未见基因组DNA污染,经BLAST比对为100%吻合,不同条件下扩增成功率在30%～90%之间.结论 单细胞RT-PCR是一种行之有效的单细胞基因表达的研究工具,提高Mg2+反应浓度并采用巢式引物有利于提高扩增成功率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏照帆	第二军医大学长海医院全军烧伤研究所	187	1280	16.0	25.0
2	熊杰	第二军医大学长海医院全军烧伤研究所	4	6	1.0	2.0