猪白细胞介素-18基因表达及重组蛋白的纯化

• 作者: 唐满华 唐秀英 朱文冠 李琳 温纳相 程含波 裴仉福 陈瑞爱
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪白细胞介素-18 基因表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告·检测技术
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: Q344.13
• 字数: 3871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-1280.2007.02.002

摘要

以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18.将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导表达.SDS-PAGE及Western-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 ku,与预期大小相符.将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白.