大鼠抗组胺药敏感性细胞色素P450基因的克隆及其反转录病毒载体的构建和鉴定

• 作者: 杨天燕 王乃平 陈海英 韦锦斌
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: HP450基因 克隆 质粒载体 反转录病毒载体
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2283-2286
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2007.12.043

摘要

目的:构建反转录病毒表达载体pLXSN-HP450.方法:实验于2004-12/2006-05在广西医科大学生化药理实验室完成.提取正常的Wistar大鼠肝组织的总RNA,反转录-聚合酶链反应技术扩增出抗组胺药敏感性细胞色素P450(HP450)基因.并克隆到pMD18-T载体,经蓝白斑筛选后进行聚合酶链反应,酶切,测序鉴定.BamHI,EcoRI双酶切构建好的重组质粒和反转录病毒载体pLXSN在16℃下经T4连接酶连接过夜,并转化到感受态细胞DH5α,以菌液为模板做聚合酶链反应,结合酶切筛选及鉴定阳性重组反转录病毒载体pLXSN-HP450.结果:反转录-聚合酶链反应扩增出HP450基因.重组质粒pMD18-HP450经双酶切后得到1 461 bp的酶切产物.测序的结果用Clustal W在线与Genebank对比,此目的基因与基因库中的H1基因100%同源.阳性重组载体pLXSN用其菌液聚合酶链反应扩增出目的条带.对重组体pLXSN-HP450进行双酶切得到1 461 bp和5 900 bp两条特异性条带.结论:克隆了HP450基因,并成功构建了重组反转录病毒载体pLXSN-HP450,为进一步研究肝癌的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦锦斌	广西医科大学药理教研室	68	379	11.0	17.0
2	杨天燕	广西医科大学第一附属医院药剂科	31	80	5.0	7.0
3	陈海英	广西医科大学药理教研室	6	1	1.0	1.0