大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建

• 作者: 宋登新 廖晖 张树威 李明辉 祝文涛 胡伟华 郭风劲 陈安民
• 来源期刊: 中国矫形外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨骺干细胞 永生化 猿肾病毒.40
• 年，卷（期）: 2007,（16）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1245-1248
• 页数: 4页
• 分类号: R68
• 字数: 3338字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8478.2007.16.015

摘要

[目的]分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源.[方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养.应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线.用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV40Tag在转染细胞中的表达.[结果]转染后获得一个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示FGFR-3抗体染色阳性.SV40Tag抗体染色和RT-PCR结果显示SV40Tag已稳定转染入骨骺干细胞.转染细胞经扩大培养,命名为永生化骨骺干细胞.[结论]成功纯化大鼠骨骺干细胞并构建了SV40Tag永生化的骨骺干细胞株.