以增加催化结构域的基因重构方法提高里氏木霉外切型葡聚糖酶Ⅱ的活性

• 作者: 余少文 刘刚 张煜 邓丽瑜 邢苗
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 里氏木霉 催化结构域 外切型葡聚糖酶Ⅱ 基因重构 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1019-1023
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 3078字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.06.019

摘要

通过两种增加催化结构域基因的方式对里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414外切型葡聚糖酶Ⅱ(CBHⅡ)编码基因(cbh2)进行重构.第一种重构方式是在cbh2基因的上游增加内切葡聚糖酶Ⅳ(EGⅣ)的催化结构域基因(cdE),第二种重构方式是在纤维素酶CBHⅡ编码基因的下游增加其自身的cdC基因.通过PCR和基因重构手段获得重组质粒pPICZαA-cdE-cbb2和pPICZαA-cbh2-cdC,并在毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115中表达,获得重组菌株P.pastoris PEC11和PCC16,在经改良的摇瓶培养条件下能表达具有较高CMCNa(sodium carboxymethyl cellulose)酶活性的融合蛋白,培养液的CMCNa活性分别达到3.87和7.66 U/mL,其中P.pastoris PCC16表达的重构酶活性是毕赤酵母表达的单一CBHⅡ酶活性的2倍.表明采用增加结构域的方式可以有效地提高纤维素酶的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余少文	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	41	398	10.0	18.0
2	刘刚	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	36	341	10.0	17.0
3	邢苗	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	51	507	13.0	20.0
4	邓丽瑜	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	2	8	2.0	2.0
5	张煜	深圳大学生命科学学院深圳市微生物基因工程重点实验室	6	107	4.0	6.0