多药耐药基因RNAi重组腺病毒构建

• 作者: 冯培民 周东 杨天华 田林郁 程新旺 陈蕾
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 教育
• 关键词: 多药耐药基因 RNA干扰 腺病毒 星形胶质细胞模型
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 913-917
• 页数: 5页
• 分类号: G522
• 字数: 4020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.06.001

摘要

目的 构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的RNAi腺病毒载体,探讨基因治疗改善癫痫多重耐药现象的可行性.方法 根据大鼠MDR1基因序列,选择3个19nt的靶序列,设计并合成3对66nt含编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,构建pSIREN-shuttle-MDR1重组质粒,测序分析正确后转染通过马桑内酯诱导的已表达多重耐药蛋白的大鼠星形胶质细胞,通过RT-PCR法测定多药耐药蛋白(P-gp)表达量,判断所设计的3条DNA序列对于P-gp表达的抑制作用.选择抑制效率最高的1个重组质粒,将其中的MDR1 shRNA表达结构酶切后插入腺病毒载体pAdeno-X,构建的pAdeno-MDR1经Pac1酶切后与脂质体共转染HEK293细胞进行病毒包装扩增纯化,所得病毒液作酶切电泳及测序分析正确后再转染大鼠星形胶质细胞模型.RT-PCR及免疫组织化学法分别测转染前后星形胶质细胞模型的MDR1及P-gp表达量.结果 重组质粒及pAdeno-MDR1病毒经PCR、酶切、测序分析证实构建正确.病毒滴度为6×109 pfu/mL.重组腺病毒转染星形胶质细胞后MDR1及P-gp表达量减少,干扰效率接近100%.结论 成功构建针对大鼠MDR1基因的RNAi腺病毒载体,并通过体外实验证实其对大鼠MDR1基因的高效抑制作用.为进一步探索难治性癫痫的多药耐药机制和基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周东	四川大学华西医院神经内科	223	1149	17.0	25.0
2	田林郁	四川大学华西医院神经内科	21	75	5.0	7.0
3	冯培民	成都中医药大学消化内科	17	87	6.0	9.0
4	陈蕾	四川大学华西医院神经内科	46	259	9.0	15.0
5	杨天华	四川大学华西医院神经内科	13	49	4.0	6.0
6	程新旺	四川大学华西医院神经内科	2	5	1.0	2.0