芒果果实中泛变应原profilin的克隆、表达及免疫学活性鉴定

• 作者: 刘志刚 宋娟娟 康敏雄 张红云
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 芒果 泛变应原 肌动蛋白抑制蛋白 基因克隆
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 111-115
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4327字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-5101.2007.02.004

摘要

目的 克隆并表达芒果果实中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)并了解其免疫学活性.方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆芒果果实中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个芒果profilin的开放阅读框,将其与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了芒果profilin的2个型.每个型的cDNA都包括一个编码131个氨基酸的开放阅读框.序列分析结果显示所克隆到的基因与许多水果和花粉的泛变应原profilin基因有很高的同源性(＞ 70%).根据变应原的命名规则,将它们分别命名为Mani 3.01和Mani 3.02,并将这两个基因提交到GenBank数据库中,其登录号分别为DQ270547和DQ400579.重组芒果profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功地克隆和表达了芒果profilin,并证明与芒果过敏者血清有特异IgE应答.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学生命科学学院	324	1724	17.0	23.0
2	张红云	深圳大学生命科学学院	10	71	5.0	8.0
3	宋娟娟	深圳大学生命科学学院	8	61	5.0	7.0
4	康敏雄	深圳大学生命科学学院	4	44	4.0	4.0