膜芯片检测糖尿病相关线粒体基因突变位点

• 作者: 刘兵 刘松梅 周新 李霞 涂建成 秦汉 郑芳
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因芯片 糖尿病 DNA探针
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 临床实验诊断研究
• 页码范围: 1344-1348
• 页数: 5页
• 分类号: R4
• 字数: 3022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1009-9158.2007.12.007

摘要

目的 构建一种快速、系统检测与糖尿病相关的45个mtDNA位点的膜芯片.方法 针对mtDNA的45个突变位点,采用Primer Premier 5.0和NCBI BLAST软件设计野生型和突变型探针;将带有8T长臂的90条探针,通过紫外交联固定于经5×SSC Buffer处理的尼龙膜;不对称PCR方法制备单链靶序列,纯化后经Biotin标记,AP-avidin作用于NBT/BCIP显色,目视化观察结果.采用该膜芯片检测24份已知mtDNA序列的糖尿病标本,每份标本平行检测3次,评价检测结果.结果 9对引物可在同一条件下特异性扩增45个基因位点的目的片段;野生型和突变型探针的退火温度分别为(59.01±1.42)℃、(59.34±1.29)℃,能够在相同的温度下完成杂交反应;膜芯片样点清晰、规整度好,分布均匀,无漏点和连点,阳性对照和阴性对照结果理想,阴性对照的信号强度与背景持同;除16189位点外,检测结果与DNA测序方法有很好的一致性(x2=113.132,Kappa值=0.888,P=0.000).结论 成功构建可一次性检测目前国内外报道与糖尿病相关的44个mtDNA突变位点的膜芯片,适用于糖尿病患者和高危人群的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘松梅	武汉大学中南医院基因诊断中心	27	89	6.0	7.0
2	周新	武汉大学中南医院基因诊断中心	191	1214	16.0	27.0
3	郑芳	武汉大学中南医院基因诊断中心	106	420	10.0	15.0
4	李霞	武汉大学中南医院基因诊断中心	68	455	11.0	17.0
5	涂建成	武汉大学中南医院基因诊断中心	51	239	9.0	13.0
6	刘兵		15	258	9.0	15.0
7	秦汉	黄石理工学院医学院	8	33	3.0	5.0