荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒

• 作者: 刘建营 孙彦伟 宋长绪 徐维加 王晶钰 田云
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 日本脑炎病毒 荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2007.08.004

摘要

通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量R-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%.对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋长绪	广东省农业科学院兽医研究所	66	587	13.0	20.0
2	孙彦伟		48	272	9.0	13.0
3	田云		15	81	6.0	8.0
4	王晶钰	西北农林科技大学动物科技学院	102	724	14.0	22.0
5	徐维加		5	27	4.0	5.0
6	刘建营		1	8	1.0	1.0