血管生长素-1基因慢病毒载体的构建及其在间质干细胞的表达

• 作者: 吴秀丽 张彦定 张志坚 陈柏龄 黄东煜
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 间质干细胞 基因,Ang-1
• 年，卷（期）: 2007,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1618-1622
• 页数: 5页
• 分类号: R363
• 字数: 3311字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2007.08.039

摘要

目的:构建带有血管生长素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并实现该基因在大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)中的表达.方法:RT-PCR获得大鼠Ang-1基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP,在脂质体介导下与包装质粒HELPER,包膜质粒VSVG共转染293T细胞包装生产慢病毒颗粒并感染rMSCs.PCR检测Ang-1基因的插入,细胞RT-PCR检测Ang-1 mRNA表达,免疫细胞化学和Western blotting检测Ang-1蛋白的表达.结果:所获Ang-1基因经测序证实与GenBank报道的序列一致.慢病毒载体质粒PNL-Ang-1-IRES2-EGFP经SalⅠ和BamHⅠ双酶切后电泳显示1 512 bp Ang-1目的基因片段和10.5 kb PNL-IRES2-EGFP载体片段.病毒基因组PCR证实Ang-1基因插入.荧光显微镜观察到EGFP表达.细胞RT-PCR检测到Ang-1 mRNA表达.免疫细胞化学和Western blotting检测到Ang-1蛋白表达.结论:成功构建带有Ang-1基因的慢病毒载体并实现在rMSCs中的表达,为Ang-1基因修饰干细胞的应用研究奠定了基础.