人源M2二联体靶抗原PO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定

• 作者: 仲人前 吴传勇 周晔 姚定康 蒋天舒 蒋廷旺 邓安梅 陈波 陈燕
• 来源期刊: 临床军医杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 原发性胆汁性肝硬化 自身抗原 重组融合蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 323-325
• 页数: 3页
• 分类号: R575.22
• 字数: 2865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-3826.2007.03.001

摘要

目的 重组表达抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的二个靶抗原丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)、2-氧戊二酸脱氢酶复合体E2(OGDC-E2)及其连接形成的二联体PO-E2融合蛋白,已用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.方法 针对PDC-E2,OGDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体,pET28a(+)-PDC-E2,pET28a(+)-OGDC-E2,pET28a(+)-P0-E2,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE,Western-blot等鉴定. 结果经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了三种重组质粒.IPTG诱导表达后,获得三种融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性.结论 重组表达的PO-E2融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化的实验室诊断.