自身抗原PDC-E2融合蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫学鉴定

• 作者: 仲人前 吴传勇 周晔 姚定康 蒋天舒 蒋廷旺 邓安梅 陈波 陈燕
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PBC 自身抗原 PDC-E2 重组融合蛋白
• 年，卷（期）: 2007,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 267-268,280
• 页数: 3页
• 分类号: R392
• 字数: 2296字
• 语种: 中文

摘要

目的:用基因工程的方法克隆表达丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC-E2)融合蛋白,以用于人原发性胆汁性肝硬化(PBC)的早期发现和临床诊断.方法:针对PDC-E2的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-PDC-E2,转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达蛋白质.表达蛋白经SDS-PAGE、Western blot鉴定.结果:经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了PDC-E2重组质粒.IPTG诱导表达后,获得PDC-E2融合蛋白.经免疫学鉴定,重组抗原片段具有抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的免疫原性.结论:获得PBC特异性靶抗原的多肽片段,为PBC的早期发现和临床诊断提供有力工具.