hAFP增强子调控的肝癌特异性基因治疗载体的构建及活性测定

• 作者: 匡安仁 马晓娟 黄蕤
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲胎蛋白 启动子 增强子 克隆 聚合酶链式反应 载体 肝癌
• 年，卷（期）: 2007,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3474-3478
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4204字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.33.004

摘要

目的:构建新型AFP顺式作用元件调控的基因表达载体,检测该调控元件的特异性和活性表达.方法:设计含有特定酶切位点的引物,采用PCR法从HepG2细胞中克隆AFP启动子及增强子基因亚区片段.启动子与增强子长、短片段分别与含有报告基因荧光素酶基因的载体pGL-3的多克隆位点连接,构建不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc.经测序,PCR及酶切鉴定各重组体.用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系进行荧光强度及特异性表达测定.结果:成功地将AFP基因启动子、增强子克隆到报告基因载体pGL-3的多克隆位点,构建成为不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc,酶切鉴定和DNA序列分析无误.转染APLE-Luc质粒的细胞中Luciferase表达量明显高于转染APSE-Luc质粒的细胞,其在HepG2细胞中的表达明显高于SMMC7721细胞及Hela细胞.结论:成功构建AFP启动子与增强子联合调控载体APSE-Luc/APLE-Luc.AFP增强子能够特异性地增强目的基因在AFP阳性细胞中表达,并且不同的亚区活性不同,长片段的活性明显高于短片段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	匡安仁	四川大学华西医院核医学科	89	557	13.0	20.0
2	黄蕤	四川大学华西医院核医学科	47	150	7.0	10.0
3	马晓娟	四川大学华西医院核医学科	7	76	5.0	7.0