人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定

• 作者: 任建林 卢雅丕 周飞 廉亚美 张波 王琳 董菁 陈美娅
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠三叶因子 酵母双杂交载体 自激活作用
• 年，卷（期）: 2007,（34）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 3625-3628
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2007.34.013

摘要

目的:构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)酵母双杂交诱饵载体并鉴定其自激活作用.方法:从人结肠黏膜提取总RNA.RT-PCR制备总cDNA,PCR扩增hTFF3基因,TA克隆至pGEMT载体并测序鉴定.经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切,连接到pENTR11质粒构建入门克隆.LR反应获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-hTFF3,测序正确后与酵母双杂交空猎物载体pDEST22共同转化Mav203酵母细胞,SD/-Leu/-Trp固体培养基上生长.挑取单克隆划线接种到分别含有不同浓度氨基三唑(3AT)的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上,观察重组诱饵载体的自激活情况.结果:从人正常结肠黏膜成功克隆了hTFF3基因,构建了pDEST32-hTFF3酵母表达质粒.转化pDEST32-hTFF3和pDEST22的Mav203酵母细胞可在3AT浓度为30 mmol/L以下的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上生长,在3AT浓度为30mmol/L以上的培养基上则未见酵母细胞生长.结论:所构建的pDEST32-hTFF3可作为酵母双杂交的诱饵质粒.