用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体

• 作者: 刘安 许国双
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肾脏 有机阴离子转运蛋白3 小鼠 基因免疫 抗体制备
• 年，卷（期）: 2007,（15）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1826-1830
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4288字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.15.009

摘要

目的 用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体.方法 提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内素水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hOAT3载体,再从pCR2.1-hOAT3中用特异性内切酶Bcl Ⅰ和Xma Ⅰ切下hOAT3基因片段,亚克隆到载体pBQAP-TT中构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,酶切及序列分析鉴定正确后,用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fit3L同时免疫小鼠,12周后分离血清,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达.结果 成功扩增出228 bp的hOAT3细胞内亲水序列片段,构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,经酶切及序列分析鉴定正确.Western blot结果显示小鼠抗hOAT3多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白57 kD的hOAT3.免疫组化结果显示hOAT3定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜.结论 用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT3多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许国双	第四军医大学西京医院肾脏病科	31	173	8.0	12.0
2	刘安	西安市儿童医院急诊科	8	13	2.0	3.0