油菜高纯度线粒体DNA的高效提取及检测

• 作者: 李云昌 梅德圣 王巍敏 程计华 胡琼 郝建轶
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 油菜 线粒体DNA 提取 蔗糖垫衬
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 357-360
• 页数: 4页
• 分类号: S6
• 字数: 3886字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-9084.2008.03.018

摘要

为了建立一种快速、有效的油菜线粒体DNA(mtDNA)提取方法,以30℃黑暗条件下培养的油菜黄化苗为材料,通过差速离心结合蔗糖缓冲液洗涤和垫衬,利用50-250g材料分离线粒体,经SDS裂解后抽提纯化,可从每10g黄化苗中得到1靏以上的mtDNA.所获得的mtDNA经琼脂糖凝胶电泳检测发现仅有一条大小在10kb以上的条带,没有明显的降解现象,完整性良好,适用于PCR等常用分子生物学实验.利用细胞核基因的特异性引物进行PCR检测,证实没有核基因组的污染.与密度梯度离心法提取mtDNA相比,该方法具有对设备要求低、提取效率高、纯度好等优点,是进行线粒体基因组及其控制的重要性状分子生物学研究的关键基础技术.