毕赤酵母表达肽抗生素hPAB-β的纯化

• 作者: 丛延广 侯瑞 周莹冰 胡福泉 陈志瑾 饶贤才
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 肽抗生素 hPAB-β 发酵 纯化
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 332-336
• 页数: 5页
• 分类号: Q812.3
• 字数: 5911字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2008.03.022

摘要

目的 在成功构建肽抗生素hPAB-β重组毕赤酵母的基础上,深入探讨酵母表达hPAB-β的规模化纯化方法.方法 采用高密度发酵法在3.7L发酵罐中对pPIC9K-hPAB-β/GS115优5重组菌株进行发酵,收集发酵液,依次采用W-UF-II过滤系统超滤、反相层析、阳离子交换、分子筛层析等纯化技术对目标表达产物逐级进行纯化,目的 蛋白用15%的Tricine-SDS-PAGE电泳进行跟踪分析.最终纯化产物的生物学活性用平板琼脂扩散法进行测定.结果 在培养至工程菌菌体湿重约200~250g/L时,以甲醇诱导培养基诱导目的 蛋白表达,48h后菌体湿重达280g/L,目标产物表达量约75mg/L.发酵液经Mr10000膜超滤,达到去除大部分酵母色素和浓缩样品的目的 (体积浓缩约2/3).再经反相层析、离子交换、分子筛层析纯化,最终目的 产物的纯度达98%以上,得率达32.5%.且纯化的目的 蛋白具有良好的杀灭金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的活性.结论 酵母表达肽抗生素hPAB-β经膜超滤、反相层析、离子交换和分子筛层析四步纯化,实现了去除非目的 蛋白、酵母色素及脱盐的目的 ,为规模化制备hPAB-β创造了前提.