地衣芽孢杆菌γ-谷氨酰转移酶的分离和纯化

• 作者: 刘艳 李桂芝 杨革
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 工学
• 关键词: γ-谷氨酰转移酶 地衣芽孢杆菌 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 页码范围: 432-435
• 页数: 4页
• 分类号: TQ925
• 字数: 3380字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2008.03.029

摘要

γ-谷氨酰转移酶(GTE)是聚γ-谷氨酸生物合成的关键酶,地衣芽孢杆菌QBL-033是目前合成聚γ-谷氨酸的主要菌种,其γ-谷氨酰转移酶的研究尚未见报道.分离纯化该菌中的γ-谷氨酰转移酶,研究其辅酶组成,对揭示γ-谷氨酰转移酶的分子结构和性质,提高聚γ-谷氨酸产率很有必要.将培养至对数期中期的细胞离心收集并用缓冲液洗涤,细胞破碎、离心去除菌体碎片得无细胞抽提液.经DEAE-纤维素柱(HIC)、G-200凝胶过滤柱层析得到纯化大约70倍的以NADPH为辅酶的GTE和部分纯化的以NADH为辅酶的GTE,这两个酶分别对NADPH、NADH高度专一.经HPLC和SDS-PAGE测得前一种酶的分子量和亚基相对分子质量分别为235×103和39×103,表明该酶为具有相同亚基的六聚体.酶活性测定使用HLTACHI U-3000分光光度计利用NAD(P)H在340nm氧化的初速度进行.纯化结果表明,QBL-033中确实存在两种GTE.QBL-033是以NADPH为辅酶的GTE参与聚γ-谷氨酸的合成代谢,以NADH为辅酶的GTE参与聚γ-谷氨酸的分解代谢.同时发现以NADPH为辅酶的GTE在280 nm吸收很弱,在215 nm吸收很强,说明此酶中酪氨酸、苯丙氨酸含量较低.GTE最适作用温度和最适反应pH值分别为50 ℃和6.0,具有较宽的pH稳定性,并且在50℃以下较稳定.Ca2+、Co2+、Cu2+、Mn2+、Pb2+、K2+、Zn2+,以及EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Fe2+和Mg2+对酶有轻微的激活作用.图4表1参16

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨革	山东曲阜师范大学生命科学学院	7	16	2.0	3.0
2	刘艳	山东曲阜师范大学生命科学学院	5	6	2.0	2.0
3	李桂芝	山东曲阜师范大学生命科学学院	3	2	1.0	1.0