shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达的抑制作用

• 作者: 冯青青 刘红梅 彭秋平 柯传庆 梁后杰
• 来源期刊: 江西医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 RNA干扰 结肠肿瘤 抑制
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 分类号: R735.3+5|Q786
• 字数: 2865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2294.2008.04.003

摘要

目的 探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人结肠癌LoVo细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达的抑制作用.方法 合成编码shRNA的特异性DNA序列,连接到质粒pGenesil-1,采用脂质体LipofectamineTM 2000转染LoVo细胞,G418筛选4周.根据转染质粒的不同,实验分为3组:A组(正常对照组)为未转染的正常培养LoVo细胞,B组(阴性对照组)为转染pGenesil-1空载体质粒,C组(阳性实验组)为转染质粒pGenesil-1-mTOR.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测LoVo细胞mTOR基因mRNA表达,免疫印迹(Western blot)法检测mTOR蛋白表达.结果 双酶切产物琼脂糖凝胶电泳显示,重组质粒pGenesil-1-mTOR和空载体质粒pGenesil-1分别切出一条410、350 bp大小的片段.G418筛选的转染细胞在倒置荧光照相显微镜下可观察到绿色荧光.C组LoVo细胞mTOR基因mRNA表达水平明显低于A组(P<0.05),表达抑制率为73.0%.C组LoVo细胞mTOR蛋白表达水平明显低于A组(P<0.05),表达抑制率为72.5%.结论 shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰可明显抑制人结肠癌LoV0细胞mTOR基因表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁后杰	第三军医大学西南医院肿瘤科	197	911	14.0	18.0
2	刘红梅	中国人民解放军第九四医院肿瘤科	19	123	6.0	10.0
3	冯青青	中国人民解放军第九四医院肿瘤科	10	58	4.0	7.0
4	柯传庆	中国人民解放军第九四医院肿瘤科	5	3	1.0	1.0
5	彭秋平	中国人民解放军第九四医院肿瘤科	4	11	2.0	3.0