慢病毒介导的血友病B基因在离体细胞中的表达

• 作者: 徐开林 曾令宇 杜冰 潘秀英 闫冬梅 鹿群先
• 来源期刊: 中华血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 血友病B 骨髓基质细胞 基因疗法
• 年，卷（期）: 2008,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 583-586
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 4138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-2727.2008.09.002

摘要

目的 构建泛醌启动子(PUB)驱动的携带犬凝血因子Ⅸ(cFⅨ)基因的慢病毒三质粒表达载体,将其包装成病毒后,观察是否能在体外获得有效的cFⅨ表达.方法 采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒ANRF、包膜蛋白质粒VSV-G和构建的重组转移质粒PTK 164共转染293T包装细胞产生慢病毒颗粒,病毒以MOI 3:1比例感染培养的第三代骨髓基质细胞和293T细胞,用一期法测定细胞培养上清中cFⅨ活性.结果 体外成功培养出骨髓基质细胞,经病毒感染后的骨髓基质细胞和293T细胞均能表达FIX因子,活性分别为(26.30±2.10)%和(19.70±1.53)%,与对照组[(1.00±0.05)%]比较,差异有统计学意义.结论 成功构建PUB启动子驱动的cFⅨ基因的三质粒慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后成功转染至培养的骨髓基质细胞和293T细胞. 移质粒PTK 164共转染293T包装细胞产生慢病毒颗粒,病毒以MOI 3:1比例感染培养的第三代骨髓基质细胞和293T细胞,用一期法测定细胞培养上清中cFⅨ活性.结果 体外成功培养出骨髓基质细胞,经病毒感染后的骨髓基质细胞和293T细胞均能表达FIX因子,活性分别为(26.30± .10)%和(19.70±1.53)%,与对照组[(1.00±0.05)%]比较,差异有统计学意义.结论 成功构建PUB启动子驱动的cFⅨ基因的三质粒慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后成功转染至培养的骨髓基质细胞和293T细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘秀英	徐州医学院附属医院血液科	123	539	10.0	18.0
2	鹿群先	徐州医学院附属医院血液科	68	283	8.0	13.0
3	徐开林	徐州医学院附属医院血液科	207	750	11.0	19.0
4	闫冬梅	徐州医学院附属医院血液科	9	18	2.0	4.0
5	杜冰	徐州医学院附属医院血液科	33	96	6.0	8.0
6	曾令宇	徐州医学院附属医院血液科	81	270	7.0	11.0