牛干扰素-tau基因的原核表达及生物功能鉴定

• 作者: 吴忠义 曾申明 高方方
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛IFN-т 克隆 原核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 208-213
• 页数: 6页
• 分类号: S188
• 字数: 3753字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2008.02.005

摘要

采用PCR方法直接从牛早期胚胎细胞中扩增牛干扰素-tau(bovine interferon-tau,bIFN-т)基因,并克隆到pGEM-T载体中.然后将含信号肽和不含信号肽的bIFN-т片段分别与原核表达载体pET-30a(+)连接.并用IPTG诱导表达.重组蛋白经Ni2+亲合层析纯化后,通过抗病毒检测和对靶细胞形态变化的影响检验其生物学功能.实验结果显示,以胚胎裂解液为模板、不提取胚胎基因组DNA,可以从少量(5枚)的牛囊胚中直接扩增出bIFN-т基因,与GenBank(XM-593584)序列相比,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99%和97%;不含信号肽序列的重组质粒诱导表达后,经SDS-PAGE电泳检测发现约在20 kD处出现特异性蛋白条带,与目标蛋白分子量一致;纯化后重组蛋白的抗病毒活性单位为1×104IU/mg;在牛子宫内膜上皮细胞培养液中添加2.9ìg/mL纯化的rbIFN-т蛋白后24 h,细胞体积明显增大,细胞内出现囊泡状结构.表明实验获得了具有一定生物活性的rbIFN-т蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾申明	中国农业大学动物科技学院	60	610	13.0	21.0
2	吴忠义	北京市农林科学院生物中心	50	483	12.0	19.0
3	高方方	中国农业大学动物科技学院	2	15	2.0	2.0