猪带绦虫未知基因SLC10在毕赤酵母中的表达

• 作者: 丁军涛 才学鹏 景志忠 王颖 郑亚东 马全英 骆学农
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: SLC10 基因 毕赤酵母 表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 376-379
• 页数: 4页
• 分类号: S852.73+4|Q78
• 字数: 2867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.03.023

摘要

SLC10 是以反式剪切引导序列为基础,通过 RT-PCR 从猪囊尾蚴中克隆到的一个未知基因.将猪囊尾蚴SLC10 基因从重组克隆载体 pGEM-SLC10 扩增并酶切后,与相应酶切处理的毕赤酵母分泌性表达载体 pPICgK 相连接,构建重组表达载体 pPIC9K-SLC10,转化大肠杆菌 JM109,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确.纯化的重组质粒 pPIC9K-SLC10 用内切酶 Sac Ⅰ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合;采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达;通过SDS-PAGE和 Western-blot 分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了表达,但不具有免疫反应性.