抗呼吸道合胞病毒Fab噬菌体抗体库的构建及初步筛选

• 作者: 周南 张国成 李安茂 李小青 汪治华 王治静 苏字飞 邓阳彬 陈一
• 来源期刊: 中国当代儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗体库 噬菌体展示技术 Fab抗体 呼吸道合胞病毒 儿童
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 英文论著
• 页码范围: 681-685
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 语种: 中文

摘要

目的 该研究旨在利用噬菌体展示技术,构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台.解决鼠源性单克隆抗体临床应用的不足,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径.方法 从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA.用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库.对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选.结果 经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.08×107个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因.因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.46×107,经过滴定,原始抗体库的滴度为1.06×1012 pfu/mL.经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集.结论 利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建了小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性Fab噬菌体抗体库,为人源性单克隆抗体的制备提供了良好的条件,为进一步的研究奠定了基础,亦将有益于小儿呼吸道合胞病毒感染的诊断、治疗和预防.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周南		51	201	8.0	10.0
2	李小青		30	99	6.0	8.0
3	汪治华		11	45	5.0	6.0
4	邓阳彬		11	41	4.0	5.0
5	王治静		13	65	5.0	8.0
6	陈一		9	30	3.0	5.0
7	李安茂		9	58	6.0	7.0
8	张国成		1	6	1.0	1.0
9	苏字飞		1	6	1.0	1.0