人类P100蛋白表达抑制稳定株的建立及其对HeLa细胞周期的影响

• 作者: 东莉洁 何津岩 姚智 方建飞 杨洁 葛林 赵钢 邵洁
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人类P100蛋白 RNA干扰 稳定株 细胞周期
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 240-243
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2677字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.03.011

摘要

目的 构建针对人类P100(hP100)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒, 转染后筛选P100表达抑制的稳定细胞株并鉴定其表达情况;同时检测其对细胞周期的影响.方法 设计针对hP100基因的siRNA序列,构建pGenesil-shRNA-hP100质粒(small hairpin RNA,shRNA,小发夹RNA),经测序鉴定后转染入宫颈癌细胞HeLa;经G418筛选出稳定株;Western印迹检测稳定株之抑制率.流式细胞术检测hP100蛋白表达抑制对细胞周期的影响.结果 成功构建了针对hP100 的siRNA质粒,并用之筛选出hP100蛋白表达抑制的稳定株,瞬时转染及稳定株hP100表达明显降低.流式细胞术显示抑制hP100蛋白表达使G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例降低.结论 RNAi(RNA interference, RNA 干扰)可持续稳定地抑制人类P100蛋白的表达,人类P100蛋白表达抑制对细胞周期有调节作用.