炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

• 作者: 于婷 于少洋 任声权 刘树玲 易绍琼 杨秀旭 董大勇 陈薇
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 致死因子 LFn-EGFP融合蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 158-161
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3485字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.02.017

摘要

目的 研究炭疽毒素保护性抗原(protective antigen,PA)和致死因子(lethal factor,LF)N端254个氨基酸(LFn)在辅助增强型绿包荧光蛋白(EGFP)进入细胞中的作用.方法 分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长,将两片段先后克隆至pET-21a(+),构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP,在大肠杆菌中诱导表达,并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化.利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况.结果 获得较高纯度的融合蛋白LFn-EGFP,纯度可达90%以上,体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性,并且能够进入到HeLa细胞中.结论 LFn-EGFP蛋白本身也会以未知的机制进入细胞,在PA辅助时,LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加.