边缘无浆体MSP5基因序列分析及其融合蛋白的纯化

• 作者: 任巧云 关贵全 刘军龙 刘志杰 刘爱红 李有全 殷宏 罗建勋 马米玲 高金亮
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 边缘无浆体 MSP5基因 序列分析
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: S852.73
• 字数: 1758字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2008.08.004

摘要

参照已发表的主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版,采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析,结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp.将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体.将其转化到DH5á宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku.Western blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别.通过裂解、洗涤、变性、复性等方法对包涵体蛋白进行处理,获得的纯化产物浓度为1 mg/mL.