荒漠刺叶墙藓DNA的提取及PCR扩增反应条件

• 作者: 吴楠 张元明 张静 王红玲 聂华丽 陈荣毅
• 来源期刊: 干旱区研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 刺叶墙藓 DNA提取 ISSR扩增 藓类生物结皮 古尔班通古特沙漠
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 生物及生物资源
• 页码范围: 98-106
• 页数: 9页
• 分类号: Q946
• 字数: 7671字
• 语种: 中文

摘要

采用改进CTAB法、NaOH法和直接PCR法(direct PCR amplification)提取藓类生物结皮中刺叶墙藓(Tortula desertorum Broth.)基因组DNA,比较其分离效果以及ISSR扩增效果.结果表明:改进CTAB法提取的基因组DNA质量好、纯度高, ISSR扩增反应效果好.直接PCR法一旦体系建立,则是最简易快速、经济高效的模板制备方法,适于植株矮小、生物量很小的荒漠藓类植物个体模板DNA的制备.利用改进CTAB法获得的基因组DNA作为模板,对ISSR反应组分浓度及反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了刺叶墙藓最优ISSR反应体系.反应总体积为20 μL,各反应组分终浓度为:2 μL 10×Buffer,2 mM Mg2+ ,0.1 mM dNTPs ,0.2 μM引物 ,10～40 ng 模板DNA,1U Taq酶 .扩增程序为:94 ℃ 4 min,1个循环;94 ℃ 45 s, 退火温度(Tm)45 s,72 ℃ 1 min,35个循环;72 ℃ 7 min,1个循环;4 ℃保存.刺叶墙藓是组成古尔班通古特沙漠藓类生物结皮的优势种,研究结果为进一步开展刺叶墙藓遗传多样性的研究奠定了基础.