氟脲嘧啶促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF的表达

• 作者: 付艳 孙君重 杜楠 王希良 裴雪涛 赵晖
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Egr-1 5-氟脲嘧啶 粒-巨噬细胞集落刺激因子 骨髓基质细胞 活性氧中间物
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 428-432
• 页数: 5页
• 分类号: R730.5|R730.2
• 字数: 3835字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2008.05.006

摘要

目的:探索氟脲嘧啶(5-FU)对Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞造血因子GM-CSF表达的促进作用,以寻找促进化疗所致造血损伤恢复的方法.方法:构建携带Egr-1调控序列启动的GM-CSF和EGFP双顺反子基因的重组真核表达载体(pCIneo-Egr-1-EGFP-IRES-GM-CSF,Egr-EG),通过脂质体转染骨髓基质细胞系HFCL,挑出G418抗性的阳性克隆(HFCL/EG).采用RT-PCR检测5-FU处理的HFCL/EG细胞GM-CSF mRNA表达,用FACS和倒置荧光显微镜观察5-FU诱导HFCL/EG细胞EGFP表达的阳性细胞.在加入5-FU的HFCL/EG细胞培养体系中,用ELISA方法检测GM-CSF的含量;将从脐血中分离的单个核细胞接种于5- FU处理后的HFCL/EG培养上清液培养基中,观察其对GM-CFU的增殖作用;采用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸检测5- FU通过活性氧诱导Egr-1启动子CArG序列调控下游基因表达的特异性.结果:构建了Egr-1调控序列启动的双顺反子基因表达载体Egr-EG,获得其转染细胞HFCL/EG.在5- FU处理的HFCL/EG细胞中,RT-PCR显示其GM-CSF mRNA表达增强,流式细胞术证实有EGFP的显著表达.在5-FU处理后,HFCL/EG细胞培养上清液GM-CSF含量和GM-CFU形成数量分别较未处理细胞能明显增高(P<0.01);在5-FU处理的HFCL/EG细胞中,N-乙酰半胱氨酸能明显减少GM-CSF含量(P<0.01).结论:5-FU能促进Egr-1启动子上调人骨髓基质细胞GM-CSF基因的表达,从而对化疗后的造血损伤产生一定的恢复作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	裴雪涛	军事医学科学院野战输血研究所	124	630	13.0	20.0