不同种属H1启动子驱动miR-1在PK15细胞中的表达情况

• 作者: 兰干球 杨秀荣 蒋钦杨 郭亚芬 郭晓萍 陈时锦 黄建芳
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 巴马小型猪 H1启动子 miR-1 PK15细胞 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·桑蚕
• 页码范围: 2020-2025
• 页数: 6页
• 分类号: S828.89|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2015.11.2020

摘要

[目的]筛选出能高效表达外源性成熟miR-1的真核表达载体,为揭示miR-1参与猪肌肉发育及肉质性状形成的分子机制奠定基础.[方法]分别克隆巴马小型猪miR-1前体序列、H1启动子序列及人类H1启动子序列,并构建不同种属H1启动子驱动其表达的真核表达载体,利用脂质体法转染PK15细胞后,采用荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测不同种属H1启动子表达载体驱动miR-1表达效率.[结果]经酶切鉴定和测序分析证实,成功构建了3个miR-1过表达载体(pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH1-miR-1),以其转染PK15细胞24和48 h后,荧光显微镜观察发现绝大部分细胞都发出绿色荧光,且含有H1启动子细胞的荧光强于无H1启动子细胞.转染pEGFP-pH1-miR-1细胞、转染pEGFP-hH1-miR-1细胞、转染pEGFP-miR-1细胞的miR-1相对表达量分别为105.02、99.00和79.65,其miR-1表达水平均极显著高于转染pEGFP-C1细胞和空白对照组细胞(P＜0.01).[结论]重组质粒pEGFP-miR-1、pEGFP-hH1-miR-1和pEGFP-pH 1-miR-1均能在PK15细胞中高效表达miR-1,即猪源与人源的H1启动子均能提高外源性miR-1表达,可用于后续的miR-1功能研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋钦杨	广西大学动物科学技术学院	97	256	8.0	12.0
2	杨秀荣	广西大学动物科学技术学院	40	88	5.0	8.0
3	兰干球	广西大学动物科学技术学院	92	263	7.0	12.0
4	郭亚芬	广西大学动物科学技术学院	113	570	9.0	20.0
5	黄建芳	广西大学动物科学技术学院	9	12	2.0	3.0
6	郭晓萍	广西大学动物科学技术学院	13	11	2.0	3.0
7	陈时锦	广西大学动物科学技术学院	7	5	2.0	2.0