鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达

• 作者: 宁铂涛 曹江 汤永民 沈红强 钱柏芹
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 抗原,CD14/免疫学 原核细胞 大肠杆菌 重组,遗传 抗体,单克隆 流式细胞术 质粒 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 51-59
• 页数: 9页
• 分类号: R782
• 字数: 5619字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2008.01.010

摘要

目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础.方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力.结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6%;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73%、11.96%和31.57%,阻滞2次后分别下降了26.44%、21.75%和42.11%.结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤永民	浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科	83	340	10.0	13.0
2	宁铂涛	浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科	17	63	4.0	7.0
3	曹江		1	2	1.0	1.0
4	沈红强	浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科	31	83	5.0	7.0
5	钱柏芹	浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科	16	40	4.0	5.0