纤维蛋白原α链剪切位点IVS2+1 G＞C突变导致的遗传性低纤维蛋白原血症

• 作者: 丁秋兰 奚晓东 张利伟 戴菁 杨芳 王学锋 王鸿利 许冠群 陈华云
• 来源期刊: 内科理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 遗传性疾病 纤维蛋白原 基因突变 异位转录
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 118-122
• 页数: 5页
• 分类号: R554.5|Q75
• 字数: 3603字
• 语种: 中文

摘要

目的:探讨遗传性低纤维蛋白原(Fg)血症的分子发病机制.方法:检测凝血指标以明确诊断:用DNA直接测序法对患者Fg基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序以寻找基冈突变,对有突变的序列反向测序证实;通过逆转录结合巢式PCR扩增的方法,检测患者外周血中的Fg异位转录产物;构建含有突变点的突变型FGA小基因(minigene)质粒和野牛型FGA小基因质粒,将2种质粒分别转染人胚肾(HEK)293T细胞.抽提RNA,逆转录PCR(RT-PCR)后TA克隆测序.结果:先证者呈FGA基因剪切位点IVS2+1G＞C杂合突变;对于该突变,逆转录结合巢式PCR的产物经克隆后测序只检测到正常转录本,而没有发现异常转录本:突变型FGA小基因质粒转染HEK293T细胞后,抽提RNA再经RT-PCR、TA克隆、测序,揭示剪接过程中发生了FGA基因2号内含子滞留.导致终止密码的提前出现,从而使异常转录的mRNA在体内很快被降解.结论:异位转录结合体外表达证明先证者FGA基因剪切位点IVS2+1G＞C突变导致异常转录mRNA在体内很快被降解,是先证者低Fg血症的原因之一.