应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选HBV XTP12蛋白反式激活基因的上调基因

• 作者: 刘妍 宫嫚 成军 李筠 纪冬
• 来源期刊: 传染病信息
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 X蛋白 反式激活 抑制性消减杂交
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 298-300
• 页数: 3页
• 分类号: R512.62
• 字数: 2605字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-8134.2008.05.014

摘要

目的 克隆并筛选乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能.方法 应用抑制性消减杂交技术克隆并筛选XTP12反式激活的新型靶基因.以XTP12表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP12转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果 成功构建人XTP12反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到68个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000 bp插入片段.随机挑选其中28个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果 共获得28种编码基因,其中26种为已知基因编码蛋白,2种为未知功能的新基因.结论 筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞牛长调节、物质代谢、免疫及肿瘤等密切相关的蛋白编码基因,推测了XTP12可能存在的调控机制的线索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李筠		30	276	9.0	16.0
2	刘妍		62	535	12.0	21.0
3	纪冬		40	367	9.0	18.0
4	宫嫚		14	36	3.0	5.0
5	成军		12	35	2.0	5.0