复合胶原酶消化法制备高纯度小鼠雪旺细胞

• 作者: 刘伟 戴传昌 曹谊林 洪坦辉 王毅敏 祁佐良 董佳生 金羽青
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 雪旺细胞 纯化 差速分离 胶原酶 周围神经再生
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 259-262,287
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 4126字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2008.05.005

摘要

目的 建立高效、快速获得大量高纯度雪旺细胞的方法,为组织工程神经构建提供优质、足量的种子细胞.方法 取新生6～7 d的小鼠,在解剖显微镜下分离双侧坐骨神经,0.25%复合胶原酶37℃消化90 min,然后将细胞悬液接种于预先用层粘蛋白铺盘的培养瓶,贴壁培养48 h后,0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞.经过两次纯化后,运用免疫细胞化学和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度.结果 经过两次纯化后,P75NTR免疫细胞化学及流式细胞仪检测证实,通过本方法可获得纯度为99%以上的雪旺细胞,每个25 cm2培养瓶可获得(102.8±5.9)×104个细胞.结论 复合胶原酶差速消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法,仅需5 d即可制备高纯度的雪旺细胞.