牛Nanog基因克隆及其在皮肤成纤维细胞中的表达

• 作者: 云彦 李勇 王华岩 窦忠英 胡勇策 郑喜邦
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 Nanog 分子克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 547-554
• 页数: 8页
• 分类号: S823.2
• 字数: 5017字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2008.05.004

摘要

本研究克隆了牛Nanog基因,构建其真核表达载体,并转染皮肤成纤维细胞,获得能够用作核移植供核细胞的稳定转染细胞株.从6周龄的胎牛原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增Nanog基因,将其克隆到pMD-18T载体,再从酶切鉴定和测序正确的质粒上切下目的片段,定向克隆到pCDNA3-FLAG表达载体上,挑选序列正确的真核表达质粒pCDNA3-Nanog转染牛皮肤成纤维细胞,获得了稳定转染的细胞株.用RT-PCR和Western Blotting分别检测Nanog mRNA和FLAG-Nanog融合蛋白的表达,用免疫染色法验证该细胞株是否具有干细胞特征.结果表明:(1)从胎牛原始生殖嵴中克隆了序列正确的Nanog全长编码序列;(2)所构建的pFLAG-Nanog重组质粒能够在皮肤成纤维细胞中高效表达;(3)所获稳定转染的细胞株能表达ES细胞表面抗原SSEA-4和多能性维持因子Nanog、 Oct-4,表明其具有一定的多能性.为进一步研究Nanog基因功能,尤其是探讨它在家畜早期胚胎发育、生产转基因动物,以及胚胎干细胞建系中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李勇	宁夏大学生命科学学院	38	156	7.0	10.0