重组人KGF-2的制备及生物学活性研究

• 作者: 刘深 彭善云 徐东刚 徐涛 王嘉玺 王园园 王金凤 蔡欣 邹民吉
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 角质细胞生长因子-2 可溶性表达 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 34-38
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4529字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.01.010

摘要

目的:实现重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)的原核可溶性高效表达,并获得活性良好的重组蛋白.方法:将编码人成熟KGF-2的cDNA构建至pET/21a表达载体中,利用大肠杆菌BL21进行表达,对表达条件(如诱导温度和诱导时间等)进行优化,并对目的蛋白的表达情况进行电泳分析;利用阳离子交换柱对重组蛋白进行纯化,对纯化的rhKGF-2利用MTT法检测其促IEC-6及NIH/3T3细胞的增殖活性.结果:通过对表达条件的优化,rhKGF-2的表达量可占到全菌总蛋白的25%,并且基本上全部为可溶性形式表达;利用阳离子交换柱对rhKGF-2进行纯化,薄层扫描分析其纯度高于90%.利用MTT法对rhKGF-2的活性进行研究,结果表明,低浓度的rhKGF-2就能够促进IEC-6细胞增殖,但对于NIH/3T3细胞需高浓度的rhKGF-2才能促进其增殖.结论:本研究实现了对rhKGF-2的可溶性高效表达,纯化后的rhKGF-2具有较好的活性,这为进一步的功能研究以及基因工程重组药物的开发奠定了基础.