肠炎沙门氏菌种特异性FQ-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 尹念春 张振华 曹平 曹省艳 汪铭书 程安春 邓树轩 颜彬
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 工学
• 关键词: 肠炎沙门氏菌(SE) 荧光定量聚合酶链武反应(FQ-PCR) 种特异性
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 资源环境与生物技术
• 页码范围: 537-542
• 页数: 6页
• 分类号: TP3
• 字数: 4987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3772/j.issn.1002-0470.2008.05.017

摘要

根据肠炎沙门氏茵(SE)种特异性DNA序列,设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针,首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)诊断方法.该法在SE DNA含量为9×10 8～9×10 4拷贝有较好的线性关系;检测SE DNA模板的灵敏度为4拷贝/μL,检测SE细菌数的灵敏度为6 CFU/mL;特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应.分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便,结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100%,而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著(P＜0.01)高于细菌分离.研究结果表明,该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测,可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查.