PTD-NGF融合蛋白的制备、活性分析及其跨膜功能研究

• 作者: 刘中成 周磊磊 徐东刚 李仁德 王嘉玺 王园园 王金凤 蔡欣 邢微微 邹民吉 龙民慧
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白转导结构域 神经生长因子 基因表达 跨膜转运 基因融合
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 220-223,227
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2008.03.005

摘要

目的:构建PTD-NGF融合基因,检测表达的重组蛋白生物学活性和跨膜转运功能.方法:提取小鼠大脑组织RNA逆转录后,钓取β-NGF基因.PCR技术构建PTD-NGF融合基因,插入表达质粒pBV220后,转化大肠杆菌DH5α进行表达与纯化.稀释法复性后,SDS-PAGE及Western印迹鉴定表达重组蛋白.PC12细胞分化培养检测融合蛋白的生物学活性.重组蛋白与HepG2细胞共孵育,免疫组化检测其跨膜功能.结果:PTD-NGF融合基因测序正确,表达产物与目的蛋白大小相符,能与NGF抗体发生结合反应.纯化后蛋白纯度可约达90%以上,重组蛋白经复性可诱导PC12细胞出现明显分化,并能跨膜进入HepG2细胞内部.结论:成功构建了融合基因,表达的重组蛋白具有显著的生物学活性及跨膜转运功能.