利用基于GFP的FRET探针检测β-分泌酶的活性

• 作者: 储军 张智红 曾绍群 杨杰 陆锦玲
• 来源期刊: 激光生物学报
• 关键词: 阿尔茨海默病 β-分泌酶 荧光能量共振转移 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 字数: 3150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2008.01.002

摘要

β淀粉样肽(amyloid β-peptide,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimeir's disease,AD)患者脑内的异常产生和积累在AD的发病机理中扮演着重要的角色.β-分泌酶对淀粉样前体蛋白的裂解是Aβ产生的关键步骤,因此抑制β-分泌酶的活性成为AD药物治疗的一个重要策略.为了检测β-分泌酶的活性,应用基因工程技术将β-分泌酶作用底物序列(NFEV)的两端分别与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的颜色突变体一青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)相连,构建了一个基于GFP的荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)探针.荧光光谱分析结果显示,该荧光融合蛋白中CFP和YFP之间存在着较强的FRET.而当与β-分泌酶进行孵育后,FRET逐步降低,证明该探针能被β-分泌酶酶切.SDS-PAGE分析显示探针与β-分泌酶孵育后,荧光融合蛋白由60 kD大小逐渐变成30kD大小的蛋白,表明探针被β-分泌酶酶切成CFP和YFP分子,证实了荧光光谱的结果.这些结果表明,可通过检测探针的FRET效率方便地分析β-分泌酶的活性,为进一步筛选β-分泌酶的抑制剂提供了一个平台.